導(dǎo)語：水曲柳總香豆素提取分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與材料

1．1儀器722型光柵分光光度計(jì)（山東高密彩虹分析儀器有限公司），梅特勒AB135－S十萬分之一天平（德國），HH－42快速恒溫?cái)?shù)顯水箱（常州國華電器有限公司）。

1．2試藥水曲柳采自長白山，經(jīng)吉林大學(xué)藥學(xué)院張靜敏教授鑒定為水曲柳FraxinusmandschuricaRupr．；標(biāo)準(zhǔn)品白蠟樹精（自制），經(jīng)過1H－NMR，13C－NMR鑒定，HPLC峰面積歸一化法測定其含量達(dá)98％以上；其它試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取白蠟樹精對照品，置于50ml容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成含白蠟樹精0．1mg／ml的原對照品溶液。精密吸取對照品溶液適量，加甲醇定容至50ml，配制成含白蠟樹精分別為8，16，24，32，40μg／ml的對照品系列溶液。于334nm處測定吸收度，并以吸光度與對照品濃度進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝0．036X－0．0219，r＝0．9997（n＝5）。實(shí)驗(yàn)表明白蠟樹精在8～40μg／ml濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2．2精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述原對照品溶液適量2ml，加甲醇稀釋至10ml，于334nm處測定吸光度，連續(xù)6次，結(jié)果表明6次測定的RSD為0．54％，故儀器精密度良好。

2．3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將精密度實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的對照品溶液于0，1，2，4，6，8h在334nm處測定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RSD＝0．93％，對照品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．4重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取水曲柳皮粗粉6份各2g，精密稱定后置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度線，超聲30min，過濾，取濾液稀釋20倍后分別于334nm處測定吸光度，并計(jì)算其含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果6個(gè)樣品含量RSD＝1．57％，表明本法重現(xiàn)性良好。

2．5加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下的6份樣品中的任意一份，精密吸取1ml，稀釋20倍后，準(zhǔn)確加入一定量的對照品溶液，混勻，在334nm處測定吸光度，計(jì)算白蠟樹精的平均加樣回收率為98．2％，RSD＝2．07％（n＝6）。

2．6正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化以水曲柳中總香豆素為考察指標(biāo)，選擇超聲提取工藝中4個(gè)主要影響因素：浸漬時(shí)間（A），乙醇濃度（B），水浴溫度（C），提取時(shí)間（D）進(jìn)行優(yōu)化提取水曲柳中香豆素的條件。研究方法采用正交設(shè)計(jì)，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，以L9（34）正交表安排實(shí)驗(yàn)，具體影響因素及實(shí)驗(yàn)水平見表1。

表1因素水平（略）

每一實(shí)驗(yàn)號(hào)取水曲柳皮粗粉2．0g，精密稱定后置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度線，按要求浸漬一定時(shí)間后在設(shè)定的水浴溫度下進(jìn)行超聲提取，取出冷卻至室溫，過濾，取濾液稀釋20倍后進(jìn)行測定，各實(shí)驗(yàn)號(hào)平行操作重復(fù)3次。結(jié)果見表2。

由表2極差R比較可知，影響水曲柳總香豆素提取的因素主次順序?yàn)锽＞D＞A＞C，即乙醇濃度最重要，超聲時(shí)間次之。按表2的K值直觀分析，得出超聲提取最佳工藝組合為B3D3A2C3。進(jìn)一步經(jīng)方差分析表明乙醇濃度和超聲提取時(shí)間均對總香豆素的提取具有非常顯著性差異。

表2L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析（略）

3討論

由于水曲柳中的秦皮乙素與秦皮甲素的含量相對較低，但白蠟樹精的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，所以本實(shí)驗(yàn)選擇白蠟樹精為對照品考察檢測條件的可行性。游離香豆素能溶于沸水，難溶于冷水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等溶劑；香豆素苷類能溶于水、甲醇、乙醇，而難溶于乙醚、苯等極性小的溶劑［4］?？紤]對總香豆素的溶解與溶劑的毒性，本實(shí)驗(yàn)選擇乙醇作為提取水曲柳中總香豆素的溶劑。

通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及方差分析，表明乙醇濃度和超聲提取時(shí)間均對總香豆素的提取具有非常顯著性差異，而水浴溫度與浸漬時(shí)間沒有顯著性差異，結(jié)合實(shí)際條件，優(yōu)選出水曲柳皮總香豆素的最佳提取工藝為水曲柳粗粉加25倍量95％乙醇，室溫超聲提取45min。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)水曲柳皮中含有較多的糖，所以選擇95％的乙醇既能提高總香豆素的提取率，又能降低糖的溶解度，有利于香豆素成分的進(jìn)一步純化和分離。該提取工藝簡單，成本低，節(jié)能省時(shí)，對研究水曲柳的提取分離具有一定的參考價(jià)值。

【參考文獻(xiàn)】

［1］嚴(yán)仲鎧，李萬林．中國長白山藥用植物彩色圖譜［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：339．

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［4］肖崇厚．中藥化學(xué)［M］．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：227

【摘要】目的篩選水曲柳總香豆素的最佳提取工藝。方法采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9（34）考察浸漬時(shí)間，乙醇濃度，水浴溫度，提取時(shí)間4個(gè)因素對提取工藝的影響。結(jié)果水曲柳中總香豆素含量的最佳工藝為水曲柳粗粉加25倍量95％乙醇，室溫超聲提取45min。結(jié)論優(yōu)選的超聲提取條件工藝簡單，成本低，節(jié)能省時(shí)，可增加水曲柳的利用率。

【關(guān)鍵詞】水曲柳白蠟樹精正交實(shí)驗(yàn)總香豆素