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【摘要】目的研究大薊提取液對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。方法細(xì)胞形態(tài)觀察和活細(xì)胞計(jì)數(shù)法研究大薊提取液對(duì)人白血病細(xì)胞K562，肝癌細(xì)胞HepG2，宮頸癌細(xì)胞Hela，胃癌細(xì)胞BGC823生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果大薊提取液可使4種癌細(xì)胞形態(tài)上發(fā)生皺縮、變圓、脫壁、碎裂等變化，生長(zhǎng)受到明顯抑制，抑制率最高可達(dá)92.34%。結(jié)論大薊有確切的抑癌作用，并與中醫(yī)的氣血理論、藥物歸經(jīng)理論和肝腎同源理論相一致，在體外細(xì)胞水平上也有良好體現(xiàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室手段研究中醫(yī)藥同樣有著重要指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】大薊癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectsoftheextractfromCirsiumjaponicumFisch.DCtheongrowthofhumancarcinomacells.MethodsMorphologicalchangeobservationandlivecellaccountingwereusedtoinvestigatetheinhibitoryeffectsofCirsiumjaponicumFisch.DConhumanchronicmyloidleukemiaK562cell,hepatomaHepG2cell,cervicalcarcinomaHelacellandgastriccarcinomaBGC823cell.ResultsGrowthofthefourkindsofcellswassignificantlyinhibitedbytheextractfromCirsiumjaponicumFisch.DC，thehighestinhibitoryratewas92.34%andcellmorphologicalchangesincludedshrinkage,roundness,floatingandcrumbling.ConclusionCirsiumjaponicumFisch.DChasreliablecarcinoma-inhibitingeffectsandtheeffectsconformtotheqiandbloodtheory,theMeridian-reachingtheoryandtheliver-kidneyhomologytheoryoftraditionalChinesemedicine,whichshowsonceagaintheabundanceofbasictheoriesoftraditionalChinesemedicinewhichcanalsobeexhibitedinvitroandatcelllevelandhaveimportantguidancemeaningtoChinesetraditionalmedicineresearchbylaboratorymethods.

Keywords:CirsiumjaponicumFisch.DC;Carcinomacell;Growth;Inhibitoryeffects

科研與臨床緊密結(jié)合，是提高科研成效、縮短科研周期、快捷為臨床提供理論依據(jù)的有效途徑。筆者從經(jīng)中醫(yī)中藥治療取得顯著療效的癌癥病例的處方中篩選抗癌中藥，發(fā)現(xiàn)大薊提取液有良好的作用?，F(xiàn)將研究情況報(bào)告如下。

1器材

1.1藥材

大薊生藥購(gòu)于內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院藥房。取生藥適量，六蒸水洗3遍，烘干，稱量；用適量無(wú)水乙醇浸濕，充分烘干；六蒸水浸泡過(guò)夜，武火煮沸，文火煎煮20min，紗布過(guò)濾，濾渣加適量六蒸水置110℃高壓蒸氣鍋內(nèi)20min，紗布過(guò)濾；合并兩次濾液，2℃冰箱中靜置72h，高、中、低速濾紙，0.45μm，0.22μm微孔濾膜逐級(jí)過(guò)濾；濾液蒸發(fā)濃縮、滅菌、4℃保存，使用時(shí)以培養(yǎng)液稀釋至所需質(zhì)量分?jǐn)?shù)（以生藥計(jì)算）。

1.2器材與試劑

倒置相差顯微鏡（NikoneclipseTE2000-U），超凈臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），CO2培養(yǎng)箱（GALAXY&BINDER），24孔培養(yǎng)板（BIOFIL），RPMI1640、高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）。

1.3癌細(xì)胞系

人白血病細(xì)胞系K562，肝癌細(xì)胞系HepG2，胃癌細(xì)胞系BGC823，宮頸癌細(xì)胞系Hela（均由本實(shí)驗(yàn)室傳代保種），均常規(guī)傳代培養(yǎng)。

2方法

2.1分組每種細(xì)胞均設(shè)對(duì)照組（不加藥）與觀察組（加藥），觀察組分設(shè)高（12mg/ml）中（6mg/ml）、低（2mg/ml）3個(gè)劑量組。

2.2加藥處理取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的4種癌細(xì)胞，均以2×104/孔接種于24孔培養(yǎng)板，接種24h后加藥。加藥后：①每天于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化；②每隔24h各組均取5孔細(xì)胞臺(tái)朌藍(lán)拒染法計(jì)活細(xì)胞數(shù)，每孔計(jì)3次，5孔取平均值，計(jì)算出當(dāng)天的生長(zhǎng)抑制率，抑制率（%）=［（對(duì)照組平均活細(xì)胞數(shù)-觀察組平均活細(xì)胞數(shù)）/對(duì)照組平均活細(xì)胞數(shù)］×100%［1］，連續(xù)6d。

2.3抑制效果的判斷與分析①細(xì)胞形態(tài)的觀察與分析；②平均抑制率：6d的抑制率相加取平均值；③最高抑制率：每種細(xì)胞各劑量組取其6d中最高的1d。抑制率的比較采用χ2檢驗(yàn)。3結(jié)果

3.1大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞形態(tài)的影響對(duì)照組：K562（圖1）大小均勻，胞體圓整，折光性好，日益密集；HepG2（圖2）、Hela（圖3）和BGC823（圖4）緊貼板壁，胞間緊密接觸，胞質(zhì)透亮，可見(jiàn)分裂相，連續(xù)觀察，細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，集落不斷擴(kuò)大。觀察組：加藥后8h，K562多數(shù)大小不均，胞膜內(nèi)陷或出泡；HepG2、Hela和BGC823部分胞體回縮，胞質(zhì)內(nèi)有顆粒物積累。加藥后24h，K562（圖5）大部分形態(tài)異常，或皺縮或內(nèi)容物釋放形成“鬼影”，板底可見(jiàn)碎渣樣物質(zhì)；HepG2（圖6）、Hela（圖7）和BGC823（圖8）部分皺縮、變圓、脫壁，HepG2（圖6）板底已可見(jiàn)碎渣樣物質(zhì)；加藥后48h，K562多數(shù)崩解；HepG2大量浮起，碎渣量大；Hela和BGC823更多的脫壁并出現(xiàn)碎渣。

3.2大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)的平均抑制率結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)都有明顯抑制作用，但它們的抑癌效果是不同的，如高劑量組中，K562的抑制率最高，可達(dá)89.12%，BGC823的抑制率最低，也在62.85%，四者間相互比較，K562>HepG2>Hela>BGC823。

3.3大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)的最高抑制率結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)都有明顯抑制作用，但它們出現(xiàn)的最高抑癌時(shí)間不盡相同，以高劑量組為例，K562和HepG2在72h而Hela和BGC823在96h；它們的抑癌效果也不同，K562最高，為92.34%，BGC823最低為65.25%，4種細(xì)胞間相互比較，K562>HepG2>Hela>BGC823。表1大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)的平均抑制率（略）表2大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞生長(zhǎng)的最高抑制率（略）

4討論

大薊是一種常用、無(wú)毒中藥，臨床應(yīng)用廣泛，本實(shí)驗(yàn)顯示其提取液對(duì)來(lái)源于血液、消化、生殖3個(gè)系統(tǒng)的4種癌細(xì)胞均有明顯抑制作用，顯示出良好的體外抑癌效果，提示值得進(jìn)一步深入研究，為其臨床抗癌應(yīng)用提供參考。

從形態(tài)觀察到抑制率的比較均顯示大薊提取液對(duì)4種癌細(xì)胞的抑制效果為K562>HepG2>Hela>BGC823。中醫(yī)認(rèn)為，大薊“歸心、肝經(jīng)。入血”［2］，為血分藥，善治血病，故對(duì)白血病細(xì)胞抑制效果最好；歸肝經(jīng)，對(duì)肝癌細(xì)胞效果也很好；不入胃經(jīng)，故對(duì)胃癌細(xì)胞效果最差；腎主生殖，胞宮司生殖，“肝腎同源”，故對(duì)宮頸癌細(xì)胞抑制效果強(qiáng)于胃癌。本實(shí)驗(yàn)這一結(jié)果與中醫(yī)的氣血理論、藥物歸經(jīng)理論和肝腎同源理論相一致，再次說(shuō)明了中醫(yī)基本理論的博大精深，即便在體外細(xì)胞水平上也有良好體現(xiàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室手段研究中醫(yī)藥同樣有著重要指導(dǎo)意義。

【參考文獻(xiàn)】

［1］張卓然.細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2004：424.

［2］田代華.實(shí)用中藥辭典［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：118.